IPTG – 异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导剂（24mg/ml，50ml 配制）

IPTG – 异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导剂（24mg/ml，50ml 配制）

产品用途

IPTG（异丙基-β-D-硫代半乳糖苷）是分子生物学中最常用的原核表达诱导剂，用于lac启动子及衍生产动子（如T7/lac、tac、trc等）调控的蛋白表达系统。IPTG作为乳糖的结构类似物，可结合lac阻遏蛋白并使其从操纵基因上解离，从而启动下游目的基因的转录和翻译，实现重组蛋白的诱导表达。本品为24mg/ml高浓度储备液，配合蓝白斑筛选（与X-Gal共同使用）及SDS-PAGE蛋白表达分析等实验使用，是大肠杆菌蛋白表达体系中最核心的诱导试剂。

核心组分及终浓度

• 24mg/ml IPTG（异丙基-β-D-硫代半乳糖苷，分子量238.30）

配制方法（50ml 体系）

1. 称取 1.2g IPTG，置于50ml离心管中。

2. 加入约 40ml 灭菌去离子水，充分混合至完全溶解（IPTG易溶，数分钟即可溶解）。

3. 加灭菌去离子水定容至 50ml，轻轻颠倒混匀。

4. 使用 0.22μm无菌滤器过滤除菌（使用前核查滤器完整性）。

5. 在超净台内小份分装（1ml/份），标注试剂名称、浓度、配制日期。

6. -20℃避光密封保存。

使用方法

• 蛋白诱导表达：在LB培养基中接种含目标质粒的大肠杆菌，培养至OD₆₀₀≈0.4～0.8时，按1:1000比例加入IPTG储备液（每1L培养基加入1ml 24mg/ml IPTG），终浓度约0.24～1mM。继续培养2～6小时（依蛋白和菌株类型而定）后收集菌体。

• 工作浓度范围：常用终浓度0.1～1mM，最优浓度需针对具体蛋白和表达体系进行预实验优化（可设置0.1、0.3、0.5、1.0mM梯度）。

• 蓝白斑筛选：在含X-Gal的LB/Amp平板上，加入IPTG（终浓度约0.1～0.5mM），含有lacZα互补片段的阳性克隆呈蓝色，阴性克隆呈白色。

• 诱导温度和时间：常规诱导条件为37℃、2～4小时；对于易形成包涵体的蛋白，可降低诱导温度至16～30℃，诱导过夜。

关键操作要点

• 过滤除菌（重要）：IPTG不耐高温，不可高温高压灭菌，必须使用 0.22μm无菌滤器过滤除菌。使用前需核查滤器完整性（检查包装完好、未过期）。

• 无菌操作：称量、溶解、分装过程应在超净台内无菌操作，使用灭菌器具和溶剂，防止污染。

• 避免反复冻融（重要）：IPTG在反复冻融过程中活性可能下降，建议小份分装（1ml/份），每次取用一管，严禁反复冻融以防活性下降。

• 避光密封保存：IPTG溶液对光敏感，长期光照可能导致分解，应使用棕色管或铝箔包裹，-20℃避光密封保存。

• 有效期：-20℃避光保存可稳定6个月至1年。若溶液出现变色（变黄）、沉淀或浑浊，说明IPTG已降解或污染，应废弃。

• 不同体系的诱导优化：不同蛋白（可溶性/包涵体）、不同菌株（BL21/Rosetta等）、不同载体（pET/pGEX等）的最佳IPTG浓度和诱导条件差异较大，建议针对具体体系进行预实验优化。

常见问题排查

相关推荐

• LB/Amp培养基 – 含氨苄青霉素的细菌培养基

• X-Gal – 蓝白斑筛选显色底物

• LB/Amp/X-Gal/IPTG平板 – 蓝白斑筛选用筛选平板

• pET表达系统 – T7/lac启动子调控的蛋白表达载体

• SDS-PAGE蛋白电泳相关试剂 – 诱导后蛋白表达检测

• 蛋白裂解缓冲液 – 诱导后菌体裂解用