X-Gal – 蓝白斑筛选显色底物（20mg/ml，50ml 配制）

X-Gal – 蓝白斑筛选显色底物（20mg/ml，50ml 配制）

产品用途

X-Gal（5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷）是分子生物学中蓝白斑筛选实验的核心显色底物，用于检测β-半乳糖苷酶（β-galactosidase）的活性。在含有lacZα互补片段的载体（如pUC19、pBluescript等）转化的宿主菌（如DH5α、JM109、XL1-Blue等）中，当载体携带完整的多克隆位点（未插入外源片段）时，lacZα基因正常表达产生α-肽段，与宿主菌基因组编码的β-半乳糖苷酶ω-肽段互补形成有活性的β-半乳糖苷酶。该酶可水解X-Gal生成蓝色沉淀，形成蓝色菌落。当外源DNA插入多克隆位点破坏lacZα阅读框时，β-半乳糖苷酶失活，菌落呈白色（白色菌落为阳性重组子）。本品为20mg/ml高浓度储备液，配合IPTG共同使用（IPTG诱导lac启动子表达），是分子克隆中最经典的阳性克隆筛选手段。

核心组分及终浓度

• 20mg/ml X-Gal（5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷，分子量408.6）

• 溶剂：DMF（二甲基甲酰胺）

配制方法（50ml 体系）

1. 称取 1g X-Gal，置于50ml离心管中（全程避光操作）。

2. 加入约 40ml DMF（二甲基甲酰胺），充分混合至完全溶解（X-Gal在DMF中溶解较快）。

3. 加DMF定容至 50ml，轻轻颠倒混匀。

4. 小份分装（1ml/份）至无菌棕色离心管或铝箔包裹的离心管中。

5. -20℃避光密封保存。

使用方法

• 蓝白斑筛选平板制备：在高压灭菌后冷却至50～60℃的LB/Amp培养基中，依次加入：

• Ampicillin（终浓度100μg/ml）

• IPTG（终浓度0.1～0.5mM，通常取40μl 24mg/ml IPTG/100ml培养基）

• X-Gal（终浓度40μg/ml，即每100ml培养基加入200μl 20mg/ml X-Gal）

• 涂布与培养：将转化产物涂布于平板上，37℃倒置培养过夜（12～16小时）。蓝色菌落为含空载体或非重组质粒的克隆，白色菌落为插入外源片段的重组阳性克隆。

各组分功能详解

关键操作要点

• 全程避光操作（最重要）：X-Gal为光敏试剂，见光易分解失效。从称量、溶解、分装到保存全程须严格避光（可使用铝箔包裹、在暗处操作、使用棕色容器）。

• DMF安全操作（重要）：DMF（二甲基甲酰胺）易挥发且具刺激性，全程须在通风橱内操作，佩戴手套和护目镜，避免吸入蒸汽或皮肤接触。

• 分装避免反复冻融（重要）：X-Gal在反复冻融过程中易降解失效，建议小份分装（1ml/份），每次取用一管，-20℃避光密封保存，忌反复冻融。

• 加入培养基的温度要求：X-Gal（和IPTG、Ampicillin）不耐高温，须在培养基冷却至50～60℃（手触瓶壁不烫）后再加入，不可与培养基共高压灭菌。

• 有效期：-20℃避光密封保存可稳定6个月至1年。若溶液颜色变黄或出现沉淀，说明X-Gal已降解，应废弃重配。

常见问题排查

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