LB/Amp培养基 – 含氨苄青霉素LB液体培养基（1L 配制）

LB/Amp培养基 – 含氨苄青霉素LB液体培养基（1L 配制）

产品用途

LB/Amp培养基是在经典LB液体培养基基础上添加氨苄青霉素（Ampicillin）的抗性筛选培养基，用于氨苄抗性质粒转化子的大肠杆菌培养和筛选。Ampicillin作为筛选压力，仅允许携带氨苄抗性基因（如pUC19、pBluescript、pET系列等）的转化子生长，未转化或丢失质粒的菌株则被抑制。本产品是分子克隆中转化子筛选、质粒扩增、蛋白表达预培养等实验的基础培养基。

核心组分及终浓度

• 1%（W/V）Tryptone（胰蛋白胨） – 提供氮源、氨基酸和肽类

• 0.5%（W/V）Yeast Extract（酵母提取物） – 提供维生素、生长因子和核苷酸

• 1%（W/V）NaCl（氯化钠） – 维持渗透压和离子环境

• 0.1mg/ml Ampicillin（氨苄青霉素） – 抗性筛选压力

• pH 7.0

配制方法（1L 体系）

1. 称取以下各组分，置于1L烧杯中：

• 10g Tryptone

• 5g Yeast Extract

• 10g NaCl

2. 加入约 800ml 去离子水，磁力搅拌至完全溶解。

3. 滴加 5N NaOH（约0.2ml），用pH计调节pH至 7.0。

4. 加去离子水定容至 1L，充分混匀。

5. 高温高压灭菌（121℃，20min）。

6. 灭菌后冷却至室温（≤40℃）。

7. 在超净台内无菌操作，加入 1ml Ampicillin（100mg/ml），充分混匀。

8. 4℃密封保存。

使用方法

• 转化后筛选：将转化产物涂布于LB/Amp固体平板（需加15g/L琼脂），37℃倒置培养过夜（12～16小时），挑取单菌落进行后续分析。

• 质粒扩增：挑取单菌落接种于LB/Amp液体培养基中，37℃振荡培养过夜，用于质粒提取。

• 蛋白表达预培养：在LB/Amp培养基中培养含表达质粒的菌株至OD₆₀₀≈0.6～0.8，然后转入表达培养基或加入IPTG进行诱导。

• 固体平板：如需铺制平板，在灭菌前加入15g/L琼脂，灭菌后冷却至50～60℃再加Ampicillin，混匀后铺板。

关键操作要点

• Ampicillin不耐高温（最重要）：Ampicillin不耐高温，必须在培养基冷却至室温（≤40℃）后加入，否则高温导致抗生素降解失活。加药全程在超净台内无菌操作，防止母液污染及活性丧失。

• 有效期极短（重要）：含Ampicillin的液体培养基4℃保存有效期不超过3天，因Ampicillin在液体环境中降解较快。固体平板4℃避光保存可延长至1～2周。启用后需无菌取用，避免反复冻融。

• 质量判断：若培养基出现浑浊、沉淀或异常气味，可能已污染或抗生素失效，需立即弃用，不可继续使用。

• pH调节：灭菌后pH可能轻微偏移（≤±0.1），属正常现象，不可二次调节pH（避免引入污染）。

• 固体平板注意：铺制含Ampicillin的平板时，长时间培养（>16小时）可能出现卫星菌落（Ampicillin降解后周围出现微小菌落），属正常现象。若需长时间培养，建议改用羧苄青霉素（Carbenicillin，更稳定）。

常见问题排查

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