TB培养基（Terrific Broth）– 高密度细菌培养液（1L 配制）

TB培养基（Terrific Broth）– 高密度细菌培养液（1L 配制）

产品用途

TB培养基（Terrific Broth）是分子生物学中常用的高密度细菌培养基，与LB培养基相比，TB含有更高浓度的胰蛋白胨和酵母提取物（2倍以上），并添加甘油作为碳源和磷酸盐缓冲体系，可支持大肠杆菌达到更高的菌体密度（OD₆₀₀可达10以上）。TB培养基广泛用于重组蛋白高表达、质粒大规模扩增、高密度发酵等实验，是分子生物学实验室中LB培养基的升级替代品。

核心组分及终浓度

• 1.2%（W/V）Tryptone（胰蛋白胨） – 提供氮源、氨基酸和肽类

• 2.4%（W/V）Yeast Extract（酵母提取物） – 提供维生素、生长因子和核苷酸

• 0.4%（V/V）Glycerol（甘油） – 碳源和能量来源

• 17mM KH₂PO₄（磷酸二氢钾） – 缓冲体系酸性组分

• 72mM K₂HPO₄（磷酸氢二钾） – 缓冲体系碱性组分

• pH 7.0（约）

配制方法（1L 体系）

第一步：配制磷酸盐缓冲液（100ml）

1. 称取 2.31g KH₂PO₄ 和 12.54g K₂HPO₄，溶于约90ml去离子水中。

2. 充分搅拌溶解后，加去离子水定容至 100ml。

3. 高温高压灭菌（121℃，20min），备用。

第二步：配制基础培养基

1. 称取以下各组分，置于1L烧杯中：

• 12g Tryptone

• 24g Yeast Extract

• 4ml Glycerol（甘油粘稠，沿烧杯壁缓慢加入）

2. 加入约 800ml 去离子水，磁力搅拌至完全溶解。

3. 加去离子水定容至 1L，充分混匀。

4. 高温高压灭菌（121℃，20min）。

第三步：混合

1. 待基础培养基冷却至 60℃以下。

2. 在超净台内无菌加入 100ml 灭菌磷酸盐缓冲液，充分混匀。

3. 4℃密封保存。

各组分功能详解

使用方法

• 质粒扩增：挑取单菌落接种于TB培养基（含相应抗生素），37℃振荡培养过夜，可获得比LB高2～3倍的质粒产量。

• 蛋白表达：在TB培养基中接种含表达质粒的菌株，培养至OD₆₀₀≈0.6～1.0，加入诱导剂（如IPTG）进行蛋白诱导表达。

• 高密度发酵：TB培养基支持大肠杆菌OD₆₀₀可达10以上，适用于高密度发酵工艺。

• 添加抗生素：使用前按比例加入相应抗生素（如Ampicillin 100μg/ml、Kanamycin 50μg/ml等）。

关键操作要点

• 磷酸盐缓冲液单独灭菌（最重要）：磷酸盐与培养基其他组分需分别灭菌，防止高温灭菌过程中磷酸盐与培养基组分发生反应（如美拉德反应等）。待基础培养基冷却至60℃以下后再混合。

• 甘油加入操作：甘油具粘稠性，称量时应沿烧杯壁缓慢加入，用少量去离子水冲洗容器残留，确保完全转移。

• 冷却温度控制：基础培养基灭菌后需冷却至60℃以下再加入磷酸盐缓冲液，防止高温破坏缓冲体系稳定性。

• pH调节：TB培养基无需额外调节pH，磷酸盐缓冲体系可自然稳定pH至约7.0（灭菌后pH可能有轻微变化，≤±0.1）。

• 磷酸盐防潮：KH₂PO₄与K₂HPO₄易吸潮，称量后及时密封试剂瓶，确保浓度精准，避免缓冲能力偏差。

• 保存：4℃密封保存可稳定1～2个月。若出现浑浊、沉淀，说明已污染，应废弃。

常见问题排查

TB与LB培养基对比

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