TB/Amp培养基 – 含氨苄青霉素TB高密度培养基（1L 配制）

TB/Amp培养基 – 含氨苄青霉素TB高密度培养基（1L 配制）

产品用途

TB/Amp培养基是在高密度TB培养基（Terrific Broth）基础上添加氨苄青霉素（Ampicillin）的抗性筛选高密度培养基，用于氨苄抗性质粒转化子的高密度培养和重组蛋白高表达。TB培养基富含胰蛋白胨和酵母提取物，甘油提供碳源，磷酸盐缓冲体系维持pH稳定，支持大肠杆菌达到更高的菌体密度（OD₆₀₀可达10以上）。Ampicillin作为筛选压力，确保质粒在菌株扩增过程中的稳定性。本产品是重组蛋白高表达、质粒大规模扩增、高密度发酵等实验的理想培养基。

核心组分及终浓度

• 1.2%（W/V）Tryptone（胰蛋白胨） – 提供氮源、氨基酸和肽类

• 2.4%（W/V）Yeast Extract（酵母提取物） – 提供维生素、生长因子和核苷酸

• 0.4%（V/V）Glycerol（甘油） – 碳源和能量来源

• 17mM KH₂PO₄（磷酸二氢钾） – 缓冲体系酸性组分

• 72mM K₂HPO₄（磷酸氢二钾） – 缓冲体系碱性组分

• 0.1mg/ml Ampicillin（氨苄青霉素） – 抗性筛选压力

• pH 7.0（约）

配制方法（1L 体系）

第一步：配制磷酸盐缓冲液（100ml）

1. 称取 2.31g KH₂PO₄ 和 12.54g K₂HPO₄，溶于约90ml去离子水中。

2. 充分搅拌至完全溶解后，加去离子水定容至 100ml。

3. 高温高压灭菌（121℃，20min），备用。

第二步：配制基础培养基

1. 称取以下各组分，置于1L烧杯中：

• 12g Tryptone

• 24g Yeast Extract

• 4ml Glycerol（甘油粘稠，沿烧杯壁缓慢滴加，用少量去离子水冲洗容器残留以确保完全转移）

2. 加入约 800ml 去离子水，磁力搅拌至完全溶解。

3. 加去离子水定容至 1L，充分混匀。

4. 高温高压灭菌（121℃，20min）。

第三步：混合

1. 待基础培养基冷却至 60℃以下。

2. 在超净台内无菌操作，加入：

• 100ml 灭菌磷酸盐缓冲液

• 1ml Ampicillin（100mg/ml）

3. 充分混匀后，4℃密封保存。

各组分功能详解

使用方法

• 质粒大规模扩增：挑取单菌落接种于TB/Amp液体培养基中，37℃振荡培养过夜，可获得比LB/Amp高2～3倍的质粒产量。

• 重组蛋白高表达：在TB/Amp培养基中接种含表达质粒的菌株，培养至OD₆₀₀≈0.6～1.0，加入诱导剂（如IPTG）进行蛋白诱导表达。高密度培养可显著提高目的蛋白产量。

• 高密度发酵：TB/Amp培养基支持大肠杆菌OD₆₀₀可达10以上，适用于摇瓶高密度培养和小型发酵罐工艺。

• 固体平板：如需铺制TB/Amp平板，在灭菌前加入15g/L琼脂，灭菌后冷却至50～60℃后加Ampicillin，混匀后铺板。

关键操作要点

• 磷酸盐缓冲液单独灭菌（最重要）：磷酸盐与培养基其他组分必须分别灭菌，防止高温灭菌过程中磷酸盐与培养基组分发生反应（如美拉德反应等）。待基础培养基冷却至60℃以下后，在超净台内同步加入灭菌缓冲液及Ampicillin。

• Ampicillin不耐高温（最重要）：Ampicillin不耐高温，严禁提前加入共灭菌，须在培养基冷却至60℃以下后加入，避免活性丧失。

• 甘油完全转移：甘油具粘稠性，沿烧杯壁缓慢滴加，用少量去离子水冲洗容器残留以确保完全转移。

• 磷酸盐防潮：KH₂PO₄与K₂HPO₄易吸潮，称量后立即密封试剂瓶，精准控制用量以保证缓冲浓度，避免缓冲能力偏差。

• 保存：含Ampicillin的TB培养基4℃密封保存有效期不超过3天（Ampicillin在液体中降解较快）。若出现浑浊、沉淀或异常气味，应废弃。固体平板4℃避光保存可延长至1～2周。

常见问题排查

TB/Amp与LB/Amp培养基对比

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