SOB培养基 – 超级肉汤培养基（1L 配制）

SOB培养基 – 超级肉汤培养基（1L 配制）

产品用途

SOB培养基（Super Optimal Broth）是分子生物学中感受态细胞制备最常用的培养基之一，也是SOC培养基的基础配方。与LB培养基相比，SOB含有更高浓度的胰蛋白胨（2%）和酵母提取物（0.5%），并添加KCl和MgCl₂等无机盐，可支持大肠杆菌快速生长至较高密度。SOB培养基广泛用于感受态细胞制备（尤其是化学法和电转法感受态）、转化后复苏前的菌体培养等实验，是分子克隆实验中不可或缺的基础培养基。

核心组分及终浓度

• 2%（W/V）Tryptone（胰蛋白胨） – 提供氮源、氨基酸和肽类

• 0.5%（W/V）Yeast Extract（酵母提取物） – 提供维生素、生长因子和核苷酸

• 0.05%（W/V）NaCl（氯化钠） – 维持渗透压和离子环境

• 2.5mM KCl（氯化钾） – 补充钾离子，调节渗透压

• 10mM MgCl₂（氯化镁） – 提供镁离子，稳定细胞膜和核酸结构

• pH 7.0

配制方法（1L 体系）

第一步：配制KCl和MgCl₂储备液

1. 250mM KCl溶液：称取 1.86g KCl，溶于约90ml去离子水中，定容至 100ml，备用。

2. 2M MgCl₂溶液：称取 19g MgCl₂（MgCl₂·6H₂O），溶于约90ml去离子水中，定容至 100ml，高温高压灭菌，备用。

第二步：配制基础培养基

1. 称取以下各组分，置于1L烧杯中：

• 20g Tryptone

• 5g Yeast Extract

• 0.5g NaCl

2. 加入约 800ml 去离子水，磁力搅拌至完全溶解。

3. 量取 10ml 250mM KCl溶液，加入烧杯中，混匀。

4. 滴加 5N NaOH溶液（约0.2ml），用pH计调节pH至 7.0。

5. 加去离子水定容至 1L，充分混匀。

6. 高温高压灭菌（121℃，20min）。

7. 灭菌后4℃密封保存。

第三步：使用前加入MgCl₂

1. 使用前，在超净台内无菌加入 5ml 灭菌2M MgCl₂溶液。

2. 充分混匀后即可使用（避免剧烈震荡）。

各组分功能详解

使用方法

• 感受态细胞制备：挑取单菌落接种于SOB培养基（不含抗生素）中，37℃振荡培养至OD₆₀₀≈0.4～0.6，用于化学法或电转法感受态细胞制备。

• 转化前菌体培养：SOB培养基为转化前菌体培养提供更丰富的营养，提高感受态细胞的质量和转化效率。

• SOC培养基前体：SOB培养基加入过滤除菌的葡萄糖（终浓度20mM）即配制成SOC培养基（转化后复苏用）。

• 抗生素添加：如需含抗生素的SOB培养基，在使用前加入相应抗生素（如Ampicillin、Kanamycin等）。

关键操作要点

• MgCl₂使用前添加（最重要）：MgCl₂严禁提前加入后共灭菌（高温易导致镁离子沉淀，形成不溶性镁盐），必须在使用前无菌添加。加药全程在超净台内操作，防止杂菌污染。

• NaCl浓度精确称量（重要）：SOB培养基中NaCl含量很低（仅0.5g/L），远低于LB培养基（10g/L），称量时需精准把控，避免浓度偏差影响渗透压和菌体生长。可使用精确分析天平称量。

• pH调节：滴加NaOH后充分混匀再复核pH，灭菌后pH轻微偏移（≤±0.1）属正常现象，不可二次调节。

• KCl溶液混匀：KCl溶液加入后需充分搅拌均匀，避免局部浓度过高。

• Tryptone与Yeast Extract防潮：Tryptone与Yeast Extract易吸潮，称量后立即密封试剂瓶，防止吸潮结块影响溶解效率。

• MgCl₂混合后避免剧烈震荡：加入MgCl₂后避免剧烈震荡，以防盐析或起泡。

SOB、SOC与LB培养基对比

常见问题排查

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