2×YT培养基 – 富营养细菌培养基（1L 配制）

2×YT培养基 – 富营养细菌培养基（1L 配制）

产品用途

2×YT培养基（2倍YT培养基，2× Yeast Extract-Tryptone）是分子生物学中富营养细菌培养基，与LB培养基相比，含有双倍浓度的胰蛋白胨和酵母提取物，可支持大肠杆菌达到更高的菌体密度和质粒产量。2×YT培养基广泛用于质粒DNA的大规模扩增（质粒提取）、M13噬菌体及丝状噬菌体（如f1、fd）的增殖培养、重组蛋白表达及菌种活化等实验，是分子生物学实验室中LB培养基的重要补充培养基。

核心组分及终浓度

• 1.6%（W/V）Tryptone（胰蛋白胨） – 提供氮源、氨基酸和肽类

• 1%（W/V）Yeast Extract（酵母提取物） – 提供维生素、生长因子和核苷酸

• 0.5%（W/V）NaCl（氯化钠） – 维持渗透压和离子环境

• pH 7.0

配制方法（1L 体系）

1. 称取以下各组分，置于1L烧杯中：

• 16g Tryptone

• 10g Yeast Extract

• 5g NaCl

2. 加入约 800ml 去离子水，磁力搅拌至完全溶解（搅拌时避免局部过热，确保各成分均匀分散）。

3. 滴加 5N NaOH，用pH计调节pH至 7.0。

4. 加去离子水定容至 1L，充分混匀（定容后再次混匀，保障培养基营养成分分布一致，利于菌体生长）。

5. 分装至适当容器（分装容器需耐高温高压且洁净无菌，灭菌前检查密封性）。

6. 高温高压灭菌（121℃，20min）。

7. 灭菌后4℃密封保存。冷却过程中避免容器密封过紧，防止负压变形。

各组分功能详解

使用方法

• 质粒DNA大规模扩增：挑取单菌落接种于2×YT培养基（含相应抗生素）中，37℃振荡培养过夜，可获得比LB更高产量的质粒DNA。

• M13/丝状噬菌体增殖：2×YT培养基是M13噬菌体及丝状噬菌体（f1、fd、M13KO7等）培养的标准培养基，可支持高滴度噬菌体的增殖。常见于噬菌体展示、单链DNA制备等实验。

• 重组蛋白表达：在2×YT培养基中接种含表达质粒的菌株，培养至适宜OD₆₀₀后加入诱导剂进行蛋白诱导表达。

• 菌种活化：用于甘油菌种或冻干菌种的第一步活化培养。

2×YT与LB培养基对比

关键操作要点

• 有效期极短（最重要）：2×YT培养基成品4℃密封保存，有效期不超过7天。启用后需无菌取用，若出现浑浊、沉淀、异味等污染迹象，需立即弃用。

• 分装容器要求：分装容器需耐高温高压且洁净无菌，灭菌前检查密封性；冷却过程中避免容器密封过紧，防止负压变形。

• pH调节：灭菌后pH可能轻微偏移（≤±0.1），属正常现象，不可二次调节pH。

• 搅拌与定容：搅拌溶解时避免局部过热，确保各成分均匀分散；定容后再次混匀，保障培养基营养成分分布一致，利于菌体生长。

• 抗生素添加：如需含抗生素的2×YT培养基，灭菌后冷却至50～60℃后加入相应抗生素（如Ampicillin 100μg/ml、Kanamycin 50μg/ml等）。

• NaCl浓度差异注意：2×YT培养基的NaCl浓度为0.5%，低于LB培养基（1%），使用时需注意渗透压差异对特定菌株的影响。

常见问题排查

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