Φb×broth – 噬菌体扩增培养基（1L 配制）

Φb×broth – 噬菌体扩增培养基（1L 配制）

产品用途

Φb×broth是分子生物学中P1噬菌体（P1 phage）和λ噬菌体（λ phage）扩增培养的标准培养基。该培养基富含胰蛋白胨和酵母提取物，支持大肠杆菌宿主菌的快速生长，MgSO₄提供噬菌体感染和增殖所必需的二价阳离子（Mg²⁺），是噬菌体文库扩增、P1噬菌体转导、λ噬菌体包装、噬菌体滴度测定等实验的核心培养基。本产品也是噬菌体展示、重组噬菌体扩增等噬菌体相关实验的基础培养基。

核心组分及终浓度

• 2%（W/V）Tryptone（胰蛋白胨） – 提供氮源、氨基酸和肽类

• 0.5%（W/V）Yeast Extract（酵母提取物） – 提供维生素、生长因子和核苷酸

• 0.5%（W/V）MgSO₄·7H₂O（七水硫酸镁） – 提供二价阳离子，促进噬菌体吸附和增殖

• pH 7.5

配制方法（1L 体系）

1. 称取以下各组分，置于1L烧杯中：

• 20g Tryptone

• 5g Yeast Extract

• 5g MgSO₄·7H₂O

2. 加入约 800ml 去离子水，磁力搅拌至完全溶解。

3. 滴加 1N KOH，用pH计调节pH至 7.5（缓慢滴加并充分混匀，避免局部碱性过强）。

4. 加去离子水定容至 1L，充分混匀。

5. 分装至适当容器（需耐高温高压且洁净无菌，灭菌前检查密封性）。

6. 高温高压灭菌（121℃，20min）。

7. 灭菌后4℃密封保存。冷却过程中避免密封过紧，防止容器因负压变形。

各组分功能详解

使用方法

• P1噬菌体扩增：在Φb×broth中接种宿主菌（如TAP90、P1 lysogen等）和P1噬菌体，37℃振荡培养至裂解，收集噬菌体裂解液。

• λ噬菌体扩增：用于λ噬菌体的平板扩增或液体扩增培养（常见于λ噬菌体文库的扩增和制备）。

• 噬菌体滴度测定：用Φb×broth制备顶层琼脂（0.7%琼脂），与宿主菌和噬菌体稀释液混合后铺制平板，用于噬菌斑计数。

• 噬菌体转导实验：制备P1噬菌体裂解液用于P1转导实验，Φb×broth是转导后菌体培养的基础培养基。

关键操作要点

• MgSO₄·7H₂O易风化（重要）：MgSO₄·7H₂O易风化，称量后立即密封试剂瓶，称量快速高效，确保用量精准，避免影响溶解效率与浓度。若使用无水MgSO₄，称样量需按分子量折算（MgSO₄·7H₂O分子量246.47，无水MgSO₄分子量120.37）。

• Tryptone与Yeast Extract防潮：Tryptone与Yeast Extract易吸潮结块，称量后立即密封各试剂瓶。

• pH调节：使用1N KOH（而非NaOH）调节pH，需缓慢滴加并充分混匀，避免局部碱性过强。灭菌后pH轻微偏移（≤±0.1），不可二次调节，防止引入杂菌。

• 分装容器要求：分装容器需耐高温高压且洁净无菌，灭菌前检查密封性；冷却时避免密封过紧，防止容器因负压变形。

• Mg²⁺浓度重要性：Mg²⁺是噬菌体吸附宿主菌表面的必需阳离子，浓度偏差会显著影响噬菌体感染效率和扩增产量。

常见问题排查

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