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核酸提取又慢又烦?免提取释放剂5分钟裂解,告别过柱离心!

发布时间:2026-07-16      点击次数:3


核酸提取又慢又烦?免提取释放剂5分钟裂解,告别过柱离心!

做过核酸检测的朋友都懂——提取核酸那一步简直噩梦:离心、洗涤、过柱、洗脱,一套下来少说半小时起步,样本一多手都酸了。更别提提取过程中RNA容易降解、DNA可能损失、样本之间还有交叉污染的风险。传统试剂盒提取效果好是没错,但对于大批量筛查或快速诊断场景,真的太慢了。[1]那有没有一种办法,能让核酸“自己出来”?

一、什么是免提取核酸释放剂?

免提取核酸释放剂是一种专门用于样本前处理的裂解型试剂,核心功能就三个字:裂、释、稳——裂解细胞/病毒外壳、释放核酸、保护核酸不被降解。使用释放剂后,样本裂解物可以直接作为模板用于PCR或等温扩增,省去所有提取纯化步骤。整个过程从“取样→提取→扩增”简化为“取样→裂解→扩增”,时间从半小时压缩到5-10分钟。

市面上核酸释放剂的配方各有侧重,但核心功能模块基本一致。下表整理了常见配方成分及其作用:[2][3]

成分类别

常见原料

核心作用

参考浓度/配比

表面活性剂

Triton X-100(曲拉通X-100)、Tween-20、SDS

破坏细胞膜/病毒包膜及核衣壳蛋白,裂解释放核酸

Triton/Tween: 0.1%-2% (v/v);SDS: 0.1%-0.5% (w/v)

强碱/碱性剂

氢氧化钠(NaOH)、KOH

碱性环境破坏蛋白结构,辅助核酸变性释放

0.005%-0.05% (w/v)(病毒用低限,细菌/环境样本用高限)

缓冲体系

Tris-HCl(弱碱体系适用)

稳定pH,为核酸提供适宜的保存环境

10-50mM(pH 7.5-8.5)

螯合剂

EDTA

螯合金属离子,抑制DNase/RNase活性,保护核酸

0.1-1mM(若产物直接扩增)或1-5mM(若产物稀释后扩增)

核酸保护剂

海藻糖、PEG8000、BSA

在核酸表面形成保护层,维持核酸稳定

海藻糖0.1-0.5M

还原剂

DTT、β-巯基乙醇(BME)

打断蛋白二硫键,辅助裂解

DTT 10-50mM(BME等效)

溶剂

无酶无菌水、DEPC水

作为载体,保证各组分均匀分散

余量

本表汇总自不同技术路线(弱碱体系与强碱体系),具体配制需选定一条完整路线,不可跨体系随意混配。

Triton X-100和Tween-20对PCR抑制较轻,SDS抑制强烈,使用SDS体系时建议裂解后稀释5-10倍再进行扩增。

不同样本类型需优化碱浓度:病毒及革兰氏阴性菌可用0.005%-0.01% NaOH;革兰氏阳性菌及环境样本可用0.02%-0.05%。

二、配制步骤(以常用的碱性裂解体系为例)

1. 配制缓冲液:将Tris-HCl(终浓度10-50mM)溶于无酶无菌水中,调节pH至7.5-8.5。使用Tris-HCl成品粉末直接配制,无需额外调节pH。

2. 加入表面活性剂:缓慢加入Triton X-100(终浓度0.5%-2%)或Tween-20,持续搅拌至完全溶解。

3. 加入螯合剂和保护剂:加入EDTA(终浓度1-5mM)和海藻糖(终浓度0.1-0.5M),混匀。

4. 最后加碱性剂:缓慢加入NaOH(终浓度0.01%-0.05%),搅拌均匀。[4]

5. 定容与分装:加无酶无菌水定容,0.22μm滤膜过滤除菌,若配制环境洁净度足够,可省略过滤除菌步骤,改用无菌操作配制。分装至无菌离心管中,室温或4℃保存。

 

⚠️ 关键提醒:碱性剂一定要最后加,避免与其他成分提前反应失效;所有器具和溶剂必须无核酸酶,否则释放出的核酸会被迅速降解;配制全程在洁净区操作,避免外源核酸污染;释放剂中表面活性剂浓度过高可能抑制下游PCR反应,建议根据实际扩增体系进行预实验验证;配制好的释放剂建议一周内用完,不宜长期存放。

三、商业化便捷选择——杭州富沃克生物

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产品名称

规格

产品货号

免提取核酸释放剂

1ml/10ml

MTQ606-01

 

官网链接:免提取核酸释放剂 一步式释放核酸 省去繁琐提取纯化步骤 保护核酸完整不降解 兼容多种样本与各类扩增实验-杭州富沃克生物科技有限公司

邮箱:support@fwkbio.com

厂家联系微信号:19850855600

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参考文献

[1] 内蒙古某生物技术企业. 样本释放剂(新闻报道)[EB/OL]. 科技日报, 2020-10-21.

[2] 湖南圣湘生物科技有限公司. 核酸释放剂、核酸PCR扩增方法和PCR扩增试剂盒: CN109402240A[P]. 2019-03-01.

[3] 闫亚平, 张鑫. 一种核酸免提取试剂及其在核酸检测中的应用和使用方法: CN112522370A[P]. 2021-03-19.

[4] 一种鼻/咽拭子免核酸提取试剂及其应用: CN202411135992[P]. 2024.

 

 


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