科研好物｜6× Loading Buffer

跑核酸电泳的朋友都懂——样品好不容易提好了、PCR也扩出来了，结果上样时样品飘出孔、跑完看不清条带、或者条带歪歪扭扭……这些糟心事儿，很多时候不是因为DNA本身有问题，而是Loading Buffer没选对或没配好。

今天整理一份6× DNA Loading Buffer的简明指南，配方、配制要点、怎么选，一次说清。

一、6× Loading Buffer是什么？

6× DNA Loading Buffer是核酸电泳前的“必备搭档”，核心干三件事：

1. 增加密度：甘油或Ficoll让样品沉到点样孔底部，防止飘出。

2. 指示电泳进度：溴酚蓝、二甲苯青等染料随DNA一起迁移，告诉你“跑到哪儿了，该不该停”。

3. 保护DNA：EDTA螯合金属离子，抑制核酸酶降解DNA。

之所以配成6倍浓缩（6×） ，是为了用的时候1份buffer + 5份样品混合就行，稀释成1×工作浓度。

二、标准配方长什么样？

市面上的6× Loading Buffer主要有几种主流版本，区别在于增稠剂（甘油 vs Ficoll）和染料组合不同。以下是多方来源交叉验证的配方汇总：[1][2][3]

❗注意：含SDS的版本（如Sigma G2526）会让蛋白质变性，适合含较多蛋白的粗提样品；但如果后续要切胶回收或做酶切，建议选不含SDS的版本，避免SDS干扰后续实验。

染料迁移参考（1%琼脂糖凝胶）：

三、配制步骤（以经典甘油版为例，配制10 mL）

以下配制采用0.25%染料浓度，适合常规琼脂糖凝胶电泳。若希望显色更浅、条带更清晰，可适当减半至0.1–0.125%。[3]

1. 溶解染料（关键改进） ：取一支15 mL离心管，加入约5 mL去离子水。称取0.025 g溴酚蓝和0.025 g二甲苯青FF，缓慢加入水中，涡旋振荡或磁力搅拌至完全溶解（染料完全溶解后溶液应呈深蓝色/蓝紫色，无可见颗粒）。

2. 加EDTA：加入0.6 mL 0.5 M EDTA母液（pH 8.0） ，混匀。

3. 加甘油：加入3 mL甘油（终浓度30%），充分涡旋混匀30秒至完全均匀。

4. 定容：加去离子水定容至10 mL，盖紧管盖颠倒混匀10–15次，再短暂涡旋确保均匀。

5. 分装与保存：分装成小份（如500 μL/管），室温避光保存即可（可用锡纸包裹或存放于不透明离心管盒中）。如需长期保存（>6个月），可-20°C冻存，避免反复冻融。

6. 使用前：若长期存放后出现沉淀，65°C水浴或金属浴加热10分钟，涡旋混匀后即可使用。

关键提醒：

l 溴酚蓝和二甲苯青较难溶解，建议先加少量水搅拌成糊状，再逐步稀释。

l 不需要调pH，各组分溶解后直接定容即可。

l 若长期存放后出现沉淀，可于65°C水浴或金属浴加热10分钟，取出后充分涡旋混匀即可恢复使用。

l 使用比例：每5 μL DNA样品加1 μL 6× Loading Buffer，混匀后直接上样。

四、有SDS和没SDS，怎么选？

省时省力，拿来即用

称量、溶解、担心沉淀……这些琐事交给专业的来。杭州富沃克生物科技有限公司提供即用型6× DNA Loading Buffer，严格参照标准配方质控，开瓶即用，帮你把宝贵时间留给真正的实验。

产品信息：

了解更多产品信息，欢迎咨询杭州富沃克生物科技有限公司。

官网链接：6X loading buffer-杭州富沃克生物科技有限公司

邮箱：support@fwkbio.com

厂家联系微信号：19850855600

参考文献

[1] Sigma-Aldrich. Gel Loading Buffer 6X Tracking Dye. Product G2526

[2] b.j.vanbergenhenegouwen. Request for a 6x gel loading buffer receipt. bionet.molbio.methds-reagnts, 1999. IUBio Archive.

[3] Yeasen Biotechnology. 6× DNA Loading Buffer. Product 10213ES