RNA残留反复出现？从RNase A配制到使用的完整排查指南

一、RNase A是干什么的？—— 一个“RNA剪刀”

RNase A（核糖核酸酶A）是一种内切核糖核酸酶，专门在RNA的嘧啶残基（C和U）位置“下刀”，把RNA切成小片段。在质粒DNA或基因组DNA制备中，它的任务就是把溶液里的RNA彻底清除，不让它污染你的DNA样品。

你可以把它想象成一把专切RNA的剪刀——锋利、稳定、不挑食。RNase A溶液的核心目标有两个：把RNase A溶解好，同时把DNase活性彻底干掉。

二、一张表看懂RNase A储备液的核心配方

市面上最经典的配制方法有两种，核心区别在于溶解缓冲液和加热条件。我们整理了主流方案供你参考：[1][2]

两种方案各有优点。方案一是《分子克隆》中的经典方法，煮沸在酸性条件下进行，RNase不易沉淀；方案二操作更简洁，煮沸后直接使用。

三、配制步骤（照着做，不踩坑）

以方案一（醋酸钠法）为例，手把手教你配：[3]

Step 1：称量

精确称取 100 mg RNase A粉末，置于干净的离心管或烧杯中。

Step 2：溶解

加入 10 mL 的 10 mM 醋酸钠缓冲液（pH 5.2） ，轻轻吹打或搅拌至完全溶解。终浓度为 10 mg/mL。

Step 3：煮沸灭活DNase

将溶液放入 100℃沸水浴 中加热 15分钟。

Step 4：缓慢冷却

取出后室温缓慢冷却。不要放冰上急冷，缓慢降温有助于RNase A维持正确构象。

Step 5：调pH至中性

冷却后，加入 1/10体积（即1 mL）的 1M Tris-HCl（pH 7.4） ，将溶液pH调整至 7.4 左右。中性pH更适合后续实验使用。调pH后，如有可见沉淀，可10000 rpm离心2分钟，取上清分装；或使用0.22 μm滤器过滤除菌后分装。

Step 6：分装保存

将配好的RNase A溶液分装成小份（建议每管 100-200 μL），-20℃ 冻存。避免反复冻融，-20℃恒定保存，可稳定保存2年以上。建议小量分装，每管只取一次用量。

实验党必看的关键提醒

1. 配制时使用洁净的耗材和灭菌水，避免DNase污染。煮沸步骤是灭活DNase的最关键保障。

2. 煮沸时注意pH：如果在中性pH条件下煮沸，RNase A可能会沉淀。这就是为什么方案一先在酸性（pH 5.2）条件下煮沸，冷却后再调至中性。

3. 工作浓度：储备液是10 mg/mL，实际使用时通常稀释至 1-100 μg/mL 的工作浓度。例如在质粒提取中，往溶液I里加RNase A至终浓度 100 μg/mL 左右即可。（常见范围为1~100 μg/mL，具体请以你所使用的质粒提取试剂盒说明书为准。）

4. 买现成的省心选项：如果不想自己配，直接买预处理的、不含DNase的RNase A溶液，开盖即用。

5. 以上配制方法适用于普通级RNase A冻干粉。如果你购买的是‘分子生物学级（DNase free）’或‘色谱纯化’级产品，请直接参照产品说明书溶解使用，无需煮沸。

四、不想自己煮沸、调pH、分装？试试「开盖即用」的RNase A

杭州富沃克生物推出的RNase A溶液 ，直接帮你省掉所有配制步骤。产品经过严格处理，不含DNase和蛋白酶，开盖即用，无需热处理。10 mg/mL的浓度直接对标经典配方，你只需要根据实验需求稀释至工作浓度即可。

 厂家联系微信号：19850855600

邮箱：support@fwkbio.com

官网链接：RNase A-杭州富沃克生物科技有限公司

参考文献

[1] Sambrook J, Fritsch EF, Maniatis T. Molecular cloning: a laboratory manual. 2nd ed. Cold Spring Harbor (NY): Cold Spring Harbor Laboratory Press; 1989.

[2] Sambrook J, Russell DW. Molecular Cloning: A Laboratory Manual. 3rd ed. Cold Spring Harbor Laboratory Press; 2001.

[3] Ribonuclease A from bovine pancreas (R4875) – Preparation Instructions. Sigma-Aldrich. [Online] Available at: https://www.sigmaaldrich.com